一、初始杂交瘤细胞筛选（融合后筛选）
- HAT培养基筛选法
- 原理：利用氨基蝶呤阻断DNA全合成途径，迫使细胞依赖次黄嘌呤和胸腺嘧啶（应急途径）。骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT或TK酶无法存活，仅杂交瘤细胞能增殖。
- 筛选目标：排除未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞，保留B细胞-骨髓瘤杂交瘤细胞。
二、抗体分泌能力检测
- 酶联免疫吸附试验（ELISA）
- 操作：将抗原包被于酶标板，加入待测细胞上清，通过底物显色定量检测抗体浓度。
- 特点：特异性强，适用于高通量筛选，可结合双抗体夹心法提升灵敏度。
- 免疫荧光（IF）/免疫细胞化学（ICC）
- 原理：利用荧光标记二抗检测抗体与固定细胞/组织中抗原的结合，通过荧光定位判断抗体特异性。
- 流式细胞术（FACS）
- 应用：检测细胞表面抗原与抗体的结合，结合荧光标记实现单细胞水平筛选。
三、单克隆化纯培养
- 有限稀释法
- 将细胞梯度稀释至每孔0.5-1个细胞，通过多次亚克隆确保单克隆性。
- 半固体培养基筛选
- 在含甲基纤维素的培养基中形成离散克隆，机械挑取单克隆细胞群。
- 流式分选技术
- 通过荧光标记抗体或分泌抗体捕获技术（如细胞膜抗原结合法）分选目标克隆，效率较传统方法提升10倍以上。
四、高亲和力抗体筛选（进阶）
- 抗原浓度梯度法
- 通过不同浓度抗原与抗体反应的信噪比评估亲和力，信噪比越高提示亲和力越强。
- 表面等离子共振技术（SPR）
- 实时监测抗体-抗原结合动力学参数（如Kd值），量化筛选高亲和力抗体。
方法选择依据
| 筛选目标 | 推荐方法 | 优势 |
|---|---|---|
| 初始杂交瘤筛选 | HAT培养基 | 特异性排除非目标细胞 |
| 抗体分泌检测 | ELISA/流式细胞术 | 高通量、定量分析 |
| 单克隆纯化 | 有限稀释法+流式分选 | 兼顾成本与效率 |
| 亲和力优化 | 抗原浓度梯度法+SPR | 精准评估结合特性 |
注：实际应用中常组合多种技术，如HAT筛选联合ELISA检测，流式分选辅助单克隆化，以实现高效、精准的抗体筛选