在蛋白质功能研究、重组蛋白验证以及抗体药开发过程中,一级结构的精确确认(即氨基酸的线性序列)是最基础也是最关键的一步。为实现这一目标,科研人员常用两种技术路径: Edman降解:一种经典的化学方法,专注于N端氨基酸的逐个解析; 蛋白全长de novo测序:基于高分辨质谱与AI算法,可还原从N端到C
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一、什么是De Novo单克隆抗体测序? De Novo抗体测序是指不依赖参考数据库,通过高分辨率质谱(LC-MS/MS)对酶解抗体肽段进行MS/MS碎片分析,利用算法从碎片峰图中逐步推断氨基酸序列,并拼接出完整的单克隆抗体序列的技术。 与传统的数据库比对型测序不同,De Novo测序不需要任何已
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在蛋白质组学研究中,准确的蛋白质定量技术是揭示生物过程变化的核心。iTRAQ和SILAC作为两种广泛应用的蛋白质定量方法,各自具备独特优势与局限。理解两者的技术原理、适用场景与关键差异,对于制定高效可靠的实验方案至关重要。 一、iTRAQ与SILAC的基本原理解析 1、iTRAQ技术简介 iTRA
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血浆是生命体最复杂且最具研究价值的样本类型之一。它不仅承载着全身组织释放的蛋白质信息,还因其采样简便、稳定性高而被广泛用于生物标志物筛选、疾病早期诊断及精准医学研究。然而,血浆蛋白组面临两大挑战: 1、动态范围极大(>10¹⁰)——少数高丰度蛋白(如白蛋白、球
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Edman降解如何实现N端蛋白质测序?Edman降解的核心原理是基于N端氨基酸的化学选择性降解,通过环化裂解逐步去除蛋白质N端的氨基酸,并以稳定的衍生物形式进行检测。该方法基于化学反应,利用异硫氰酸苯酯(PITC)特异性地与N端氨基酸结合,通过逐级切除并鉴定多肽链N端的氨基酸,实现N端蛋白质测序。E
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在蛋白质组学研究中,“定量”技术的选择决定了实验的分辨率、可靠性与应用广度。面对多样化的样本类型与科研目标,研究人员往往在“无标记定量蛋白质组学(Label-Free)”与“标记定量蛋白质组学(Labeling,如TMT、iTRAQ)&rd
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在后基因组时代,研究人员越来越关注蛋白质层面的动态变化,以弥补基因组和转录组信息的不足。质谱(Mass Spectrometry, MS)作为现代蛋白质组学研究的核心工具,不断推动生物医学研究的深度与广度。而在众多质谱采集模式中,数据非依赖采集(Data-Independent Acquisitio
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蛋白质的结构与功能不仅由氨基酸序列决定,更受多种翻译后修饰(Post-translational Modifications, PTMs)精细调控。磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等PTMs在信号传导、转录调控、细胞周期、应激反应等生物过程中发挥着核心作用。然而,这些修饰的多样性和复杂性也使其难以全面
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随着精准医疗和个体化治疗的发展,癌症生物标志物的发现已成为癌症早筛、预后评估和治疗决策的核心环节。然而,传统蛋白质组学技术通常聚焦于蛋白质的局部片段或肽段信息,难以全面解析蛋白的结构变异,例如剪接异构体、翻译后修饰(PTMs)和非典型突变蛋白。这使得许多潜在的肿瘤相关标志物在“拼图&rd
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在现代临床研究中,探索疾病的分子机制、寻找早期诊断标志物以及指导个体化治疗成为核心课题。蛋白质组学作为连接基因表达与表型变化的关键研究手段,已被广泛应用于肿瘤学、免疫学、神经科学等多个领域。近年来,SWATH-MS(Sequential Window Acquisition of All Theor
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