用于蛋白质表征的高效液相色谱（HPLC）是利用样品中各组分在固定相与流动相之间分配系数的差异，实现复杂混合物的分离。对于蛋白质等生物大分子，HPLC不仅能够提供高精度和高分辨率的分离，还能结合其他检测手段，如质谱（MS），对蛋白质进行定性和定量分析。这一特性使得HPLC在蛋白质的分离、纯化、定量分析以及结构研究等方面具有广泛的应用。在蛋白质表征中，HPLC主要用于分离蛋白质混合物中的不同组分，帮助研究人员识别和测定蛋白质的结构和功能。通过改变HPLC的操作参数，如流动相的组成、流速、温度和压力等，可以有效地分离不同性质的蛋白质。用于蛋白质表征的高效液相色谱（HPLC）可以在短时间内处理大量样品，提供高效、准确的分析结果，因此在药物开发、食品安全、环境监测和生物医学研究等领域得到了广泛的应用。

一、常用类型及特点

1、反相高效液相色谱（RP - HPLC）

基于蛋白质表面的疏水性差异，在非极性固定相和极性流动相之间的分配系数不同而实现分离。疏水性强的蛋白质与固定相结合紧密，在流动相中的保留时间较长；疏水性弱的蛋白质则较早被洗脱出来。

2、离子交换色谱（IEX-HPLC）

依据蛋白质分子表面的净电荷数不同，与带相反电荷的离子交换树脂发生静电相互作用而分离。在不同的 pH 值和离子强度条件下，蛋白质所带电荷不同，与离子交换树脂的结合能力也不同，通过改变流动相的离子强度或 pH 值，可使不同电荷的蛋白质依次洗脱。

3、尺寸排阻色谱（SEC-HPLC）

利用蛋白质分子大小不同，在填充有多孔凝胶颗粒的色谱柱中，大分子蛋白质不能进入凝胶孔隙，直接从凝胶颗粒间隙通过，洗脱速度快；小分子蛋白质则能进入凝胶孔隙，在柱内停留时间较长，从而实现按分子大小分离。

4、亲和色谱（A-HPLC）

基于蛋白质与特定配体之间的特异性亲和力，如抗原 - 抗体、酶 - 底物、受体 - 配体等相互作用。将配体固定在色谱柱的基质上，当含有目标蛋白质的样品通过色谱柱时，目标蛋白质会与配体特异性结合，而其他杂质蛋白则被洗脱除去，然后通过改变条件使目标蛋白质与配体解离，从而实现分离和纯化。

二、用于蛋白质表征的高效液相色谱（HPLC）实验流程

1、样品准备

首先要从生物样本中提取蛋白质，根据样本来源不同，采用合适的方法，如细胞裂解、组织匀浆等。提取后需进行离心、过滤等操作以去除杂质，并进行蛋白质定量，确保上样量准确且适合后续分析。

2、HPLC 系统设置

根据蛋白质的性质和分析目的选择合适的色谱柱，如反相柱、离子交换柱等。同时，设置流动相的组成、流速、梯度洗脱程序等参数。例如，对于反相 HPLC，流动相通常由水和有机溶剂（如乙腈、甲醇）组成，并添加适量的酸（如三氟乙酸）来改善分离效果。

3、进样与分离

将蛋白质样品注入 HPLC 系统，样品在流动相的带动下进入色谱柱，在柱内根据蛋白质与固定相之间的相互作用差异进行分离。不同的蛋白质在色谱柱中的保留时间不同，从而实现分离。

4、检测与数据采集

常用的检测方法有紫外吸收检测、荧光检测等。蛋白质在特定波长下有吸收或荧光特性，通过检测器检测并记录信号，得到色谱图。色谱图中的每个峰代表一种蛋白质或蛋白质的不同形式，根据峰的位置、面积、高度等参数进行蛋白质的定性和定量分析。

5、数据分析

利用专业的色谱分析软件，对采集到的数据进行处理和分析。可以确定蛋白质的保留时间、峰面积、峰纯度等参数，用于蛋白质的鉴定、纯度评估、含量测定等。同时，还可以与标准品的色谱图进行对比，进一步确认蛋白质的身份和性质。

百泰派克生物科技提供专业的用于蛋白质表征的高效液相色谱（HPLC）服务。无论是蛋白质的分离、纯化还是结构分析，我们都能提供个性化的解决方案，确保结果的准确性和可靠性。欢迎与我们合作，共同推进科学前沿的研究工作。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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